材料和方法

材料

美(mei)沙(sha)拉秦（也稱為美(mei)沙(sha)拉秦或5-ASA，水溶性(xing)1.32 mg/ml，[11]log P 0.98[13]）來自Sigma-Aldrich（英(ying)國(guo)多塞特），潑尼(ni)松(song)龍（log P 1.59[14]）來自塞文生物技術有限公司（英(ying)國(guo)伍斯特郡(jun)）。水、甲醇、不含過氧(yang)化氫的四(si)氫呋喃和三氟乙酸從(cong)Fisher Scientific（英(ying)國(guo)拉夫(fu)伯(bo)勒）購買，為HPLC級(ji)。緩沖容(rong)量測(ce)定(ding)用(yong)NaOH和HCl的容(rong)量標準從(cong)Sigma-Aldrich處獲得。

胃腸組織

所有(you)(you)程序均(jun)由(you)內政部批準(zhun)（PPL編號(hao)70/6421），并根據英(ying)(ying)(ying)國1986年《動物(wu)（科學(xue)程序）法》進(jin)行。豬的胃腸道(dao)是(shi)在切勒(le)肉類有(you)(you)限公(gong)(gong)司(si)（英(ying)(ying)(ying)國埃塞克斯）的屠宰場從(cong)新鮮殺死(si)的雄性動物(wu)（大白種和長白種雜(za)交，n=3,95–110千克，6個月(yue)）獲得(de)的。成年新西蘭(lan)(lan)大白兔（n=6,2.1-2.3 kg，9-10周）和Wistar大鼠(shu)（n=8220-255 g，8周）購(gou)自(zi)(zi)英(ying)(ying)(ying)國哈蘭(lan)(lan)有(you)(you)限公(gong)(gong)司(si)（英(ying)(ying)(ying)國牛津(jin)郡）。所有(you)(you)動物(wu)都可以自(zi)(zi)由(you)飲(yin)水(shui)，并在處死(si)前自(zi)(zi)由(you)進(jin)食：兔子，實驗室飲(yin)食5322，添(tian)加維生素C（英(ying)(ying)(ying)國諾丁漢郡IPS）；豬，Eltabreed Bingle母豬蛋(dan)糕-豬用復合飼料（ABN有(you)(you)限公(gong)(gong)司(si)，英(ying)(ying)(ying)國彼得(de)伯(bo)勒(le)）；大鼠(shu)，Teklad全球18%蛋(dan)白質嚙齒動物(wu)飲(yin)食（哈蘭(lan)(lan)有(you)(you)限公(gong)(gong)司(si)）。

胃腸液

所有測(ce)量均在從動(dong)物(wu)胃(wei)腸(chang)(chang)液(ye)中(zhong)獲得的(de)(de)(de)上(shang)清(qing)(qing)液(ye)上(shang)進行。處(chu)死(si)動(dong)物(wu)，將胃(wei)腸(chang)(chang)道(dao)分為(wei)胃(wei)、小腸(chang)(chang)、盲腸(chang)(chang)和(he)(he)(he)結腸(chang)(chang)。如(ru)前所述(shu)，進一步細(xi)分小腸(chang)(chang)和(he)(he)(he)結腸(chang)(chang)。[6,12]將胃(wei)腸(chang)(chang)液(ye)轉移(yi)到適當的(de)(de)(de)容(rong)(rong)器中(zhong)，然后以13200 rpm的(de)(de)(de)轉速(su)離心（德(de)國漢堡Eppendorf AG 5415D離心機）(～16 110×g rcf）保存(cun)20分鐘。上(shang)清(qing)(qing)液(ye)在–80°C下保存(cun)，直至(zhi)分析。由于大鼠胃(wei)腸(chang)(chang)道(dao)的(de)(de)(de)液(ye)體(ti)容(rong)(rong)量有限(xian)，根據解(jie)剖位置收(shou)集了8只大鼠的(de)(de)(de)液(ye)體(ti)，包(bao)括胃(wei)、小腸(chang)(chang)（近端(duan)、中(zhong)部(bu)和(he)(he)(he)遠端(duan)）、盲腸(chang)(chang)和(he)(he)(he)結腸(chang)(chang)。這些(xie)液(ye)體(ti)的(de)(de)(de)緩沖(chong)容(rong)(rong)量、滲透壓和(he)(he)(he)表面張力(li)的(de)(de)(de)特征如(ru)下所述(shu)。還測(ce)定了藥物(wu)在這些(xie)液(ye)體(ti)中(zhong)的(de)(de)(de)溶(rong)解(jie)度。所有測(ce)量均以一式三份(fen)進行。由于來(lai)(lai)自大鼠的(de)(de)(de)液(ye)體(ti)的(de)(de)(de)匯集性質，所述(shu)標準偏差代(dai)表分析變(bian)異性；然而，對于兔子和(he)(he)(he)豬來(lai)(lai)說，它代(dai)表了動(dong)物(wu)間的(de)(de)(de)變(bian)異性。

滲透壓

使用數字微(wei)滲透計(ji)（5R型）（德國柏林Hermann Roebling Messtechnik）測(ce)定(ding)胃(wei)腸液上(shang)清液的(de)滲透壓(ya)，其中滲透壓(ya)是利用冰點(dian)降低理論測(ce)量的(de)。每次測(ce)量使用100μl的(de)體積。

表面張力

使(shi)用Delta-8管理軟件（版(ban)本3.8）控制的(de)Delta 8張(zhang)力計(ji)(ji)（芬蘭埃斯波Kibron公(gong)司）測量表(biao)面(mian)張(zhang)力。使(shi)用DynePlates（為張(zhang)力計(ji)(ji)設計(ji)(ji)的(de)96孔板）進行測量，每個(ge)孔中(zhong)有50μl上清液(ye)。

pH值和緩沖容量

使用配有(you)FC202電(dian)極的pH計(ji)（HI99161）測量(liang)(liang)(liang)GI上(shang)清液(ye)(ye)的pH值(zhi)(zhi)和(he)緩沖(chong)容量(liang)(liang)(liang)，該電(dian)極用于(yu)測量(liang)(liang)(liang)粘性和(he)半固體材料（Hannah Instruments，Bedfordshire，UK）。在pH值(zhi)(zhi)變化為0.5和(he)1.0單位時，通過向胃腸液(ye)(ye)中(zhong)的300μl上(shang)清液(ye)(ye)樣品(pin)中(zhong)添(tian)加小份HCl（用于(yu)腸液(ye)(ye)）或(huo)NaOH（用于(yu)胃液(ye)(ye)）來測量(liang)(liang)(liang)緩沖(chong)液(ye)(ye)容量(liang)(liang)(liang)，以達(da)到所需的pH值(zhi)(zhi)變化。然后使用以下方程式計(ji)算(suan)緩沖(chong)容量(liang)(liang)(liang)：

式中(zhong)，Ma是(shi)(shi)酸(suan)的(de)(de)摩爾濃度，Va是(shi)(shi)酸(suan)的(de)(de)體(ti)積（單(dan)位(wei)：毫升(sheng)），Vb是(shi)(shi)緩沖液的(de)(de)體(ti)積（單(dan)位(wei)：毫升(sheng)），ΔpH是(shi)(shi)pH單(dan)位(wei)的(de)(de)變化(hua)。

溶解度研究

樣品處理和溶解度測量

過(guo)量的毒(du)品(～20毫克強的松龍或～將15mg美(mei)沙拉秦）添(tian)加(jia)到含有200μl胃(wei)腸液(ye)上清液(ye)的微離(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)管（Eppendorf AG）中。然后(hou)將樣(yang)品置于(yu)振蕩浴(yu)（英國(guo)拉夫伯勒加(jia)倫坎普）中，溫度保持在(zai)37°C，轉(zhuan)速為170 rpm。24小時后(hou)，以5000 rpm的轉(zhuan)速離(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)樣(yang)品(～4472×g rcf）在(zai)37°C下放置10分鐘（離(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)機5804R，Eppendorf AG）。將上清液(ye)依(yi)次轉(zhuan)移至離(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)過(guo)濾管（康寧Spin-X，0.22μm醋酸纖(xian)維素膜，從英國(guo)萊斯特郡(jun)費希爾科學公司獲得），然后(hou)以5000 rpm離(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)(～4472×g rcf）在(zai)37°C下放置20分鐘（離(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)機5804R，Eppendorf AG）。在(zai)分析之前，取(qu)下等份濾液(ye)（50μl）并用1950μl流(liu)動相稀釋。該方法之前已(yi)經(jing)過(guo)驗證[11]，以避免藥物(wu)在(zai)生物(wu)液(ye)體中降解(jie)或與過(guo)濾器(qi)結(jie)合而影響溶解(jie)度結(jie)果。

分析方法

使(shi)用先(xian)前報(bao)告(gao)的(de)方(fang)法(fa)，通過配備(bei)紫外線(xian)檢測器（安捷倫科技1200系列，加(jia)(jia)利福(fu)(fu)尼亞州圣克拉(la)(la)(la)拉(la)(la)(la)）的(de)反(fan)相(xiang)高效液相(xiang)色譜(pu)法(fa)測定樣(yang)品(pin)(pin)中溶(rong)解的(de)潑(po)尼松(song)龍(long)(long)或美沙(sha)(sha)拉(la)(la)(la)秦的(de)量(liang)。[11]空(kong)白(bai)胃(wei)腸液樣(yang)品(pin)(pin)（來自“樣(yang)品(pin)(pin)處理和(he)溶(rong)解度測量(liang)”部分(fen)(fen)的(de)無(wu)藥物(wu)(wu)上清液）也以(yi)與測試溶(rong)解度的(de)樣(yang)品(pin)(pin)相(xiang)同(tong)的(de)方(fang)式分(fen)(fen)析，以(yi)排除在藥物(wu)(wu)保留(liu)(liu)時(shi)間出現干擾峰的(de)可能(neng)性。空(kong)白(bai)樣(yang)品(pin)(pin)以(yi)與樣(yang)品(pin)(pin)相(xiang)同(tong)的(de)方(fang)式稀釋，過濾并(bing)隨后分(fen)(fen)析。色譜(pu)條件(jian)為(wei)(wei)：流動(dong)相(xiang)（5%甲醇(chun)，95%水(shui)加(jia)(jia)0.05%三氟(fu)乙(yi)酸用于(yu)美沙(sha)(sha)拉(la)(la)(la)秦，68.8%水(shui)，25%四氫呋喃和(he)6.2%甲醇(chun)用于(yu)潑(po)尼松(song)龍(long)(long)）；反(fan)相(xiang)柱，水(shui)對稱性C8 5μm 4.6×250mm（美國(guo)馬薩諸塞州米爾福(fu)(fu)德沃(wo)特斯）用于(yu)潑(po)尼松(song)龍(long)(long)，5μm 250×4mm（德國(guo)達姆(mu)施塔(ta)特默克）用于(yu)美沙(sha)(sha)拉(la)(la)(la)秦。美沙(sha)(sha)拉(la)(la)(la)秦和(he)潑(po)尼松(song)龍(long)(long)分(fen)(fen)別在228nm和(he)254 nm處檢測，保留(liu)(liu)時(shi)間分(fen)(fen)別為(wei)(wei)7.0和(he)9.9分(fen)(fen)鐘。兩種藥物(wu)(wu)的(de)剩余分(fen)(fen)析條件(jian)相(xiang)同(tong)（即：20μl注射量(liang)，124 bar和(he)40°C柱溫下的(de)流速為(wei)(wei)1 ml/min）。

統計分析

總(zong)體數(shu)據通(tong)過單向方差分(fen)析(xi)(xi)(xi)進行分(fen)析(xi)(xi)(xi)，然后(hou)使用(yong)IBM SPSS Statistics 19（美國伊(yi)利諾伊(yi)州(zhou)芝加(jia)哥SPSS Inc.）進行Tukey事后(hou)分(fen)析(xi)(xi)(xi)，置信區(qu)間為95%。使用(yong)一(yi)元一(yi)般線性模型工具(ju)，結合Tukey事后(hou)分(fen)析(xi)(xi)(xi)，將(jiang)物種和(he)位置作為固定(ding)因素，事后(hou)結果的統計(ji)顯著(zhu)性為P<0.05。

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——摘要、介紹

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——材料和方法

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——結果和討論

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——結論、致謝！